但是，由于細(xì)胞因子在體內(nèi)的含量甚微，給細(xì)胞因子的檢測(cè)帶來(lái)困維，細(xì)胞因子的檢4.細(xì)胞病變抑制法

　　病毒可造成靶細(xì)胞的損傷，干擾素等則可抑制病毒所導(dǎo)致的細(xì)胞病變，因此可利用細(xì)胞病變抑制法檢測(cè)這類(lèi)因子。

　　二、免疫學(xué)檢測(cè)法

　　細(xì)胞因子均為蛋白或多肽，具有較強(qiáng)的抗原性。隨著重組細(xì)胞因子的出現(xiàn)，可較方便地獲得細(xì)胞因子的特異性抗血清或單克隆抗體，因此可利用抗原抗體特異性反應(yīng)的特性，用免疫學(xué)技術(shù)定量檢測(cè)細(xì)胞因子。盡管細(xì)胞因子種類(lèi)繁多，只要獲得了針對(duì)某一因子的特異性抗體，為大規(guī)模檢測(cè)臨床病人血清中細(xì)胞因子的含量提供了方便。本法僅測(cè)定細(xì)胞因子的抗原性，與該因子活性不一定相平行，因此要了解細(xì)胞因子的生物學(xué)效應(yīng)，必須結(jié)合生物學(xué)檢測(cè)法。

　　三、分子生物學(xué)方法

　　這是一類(lèi)利用細(xì)胞因子的基因探針檢測(cè)特定細(xì)胞因子基因表達(dá)的技術(shù)。目前所有*的細(xì)胞因子的基因均已克隆化，故能較容易地得到某一細(xì)胞因子的cdna探針或根據(jù)已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。利用基因探針檢測(cè)細(xì)胞因子mrna表達(dá)的方法多種多樣，常使用斑點(diǎn)雜交、northern blot、逆轉(zhuǎn)錄pcr，細(xì)胞或組織原位雜交等。實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵在于制備高質(zhì)量的核酸探針和獲得合格的待測(cè)物標(biāo)記并與目的基因互補(bǔ)的dna區(qū)域段或單鏈dna、rna。根據(jù)其來(lái)源可分為cdna探針、寡核核苷酸探針、基因組基因探針及dna探針等。其中cdna探針和人工合成寡核苷酸探針常用于斑點(diǎn)雜交及northern blot，而rna探針因穿透性好更適用于原位雜交。核酸探針技術(shù)的應(yīng)用已經(jīng)程序化，以cdna探針為例主要包括：①質(zhì)粒dna的提取;②靶dna區(qū)域段的分離;③靶dna區(qū)域段標(biāo)記;④待測(cè)樣品mrna的提取;⑤標(biāo)記cdna探針對(duì)待檢樣品的雜交;⑥放射自顯影或顯色分析。近年來(lái)出現(xiàn)的rt-pcr檢測(cè)特異性mrna的方法也廣泛用于細(xì)胞因子研究領(lǐng)域。該法具有靈敏、快速等優(yōu)點(diǎn)，甚至從1～10個(gè)細(xì)胞中就可檢出其中的特異mrna。